ישנן דרכים רבות למדידת צמיחת חיידקים, ואחת הדרכים מסובכת יותר מהאחרת. למרות שלפעמים יש להתעלם מהעקביות של המדידה, אך הדרך הקלה ביותר היא למדידת גדילת החיידקים בצורה מדויקת ולכן משתמשים בה לעתים קרובות. השיטות הנפוצות ביותר הן ניטור וספירת חיידקים, מדידת מסת יבשה או רטובה, ומדידת רמות עכירות/עכירות. במעבדה של בית הספר שלך צריכים להיות הכלים והציוד הדרוש לביצוע לפחות אחד מהניסויים הללו.
שלב
שיטה 1 מתוך 3: ניטור חיידקים חיים
שלב 1. מכינים את המרכיבים
יש הרבה כלים מיוחדים שצריך להכין וייתכן שהם לא יהיו זמינים במעבדה לביולוגיה. הכן את כל הציוד והמכלים לפני הפעלת הניסוי כך שלא תהיה טרחה במהלך התהליך. יהיה עליך להכיר כל מרכיב המשמש מיד, ואת התנאים הבסיסיים של ניסוי זה.
- הכן את חדר הספירה. יש לו תא מובנה, זכוכית מיקרוסקופ ומיקרוסקופ כך שהוא קל להתקנה ולשימוש. אתה יכול לקנות אותו במעבדה או בחנות ציוד לבית הספר. בכלי זה אמורות להיות הוראות המנחות אותך לאורך כל התהליך.
- מכינים כוס מזיגה או כוס מורחים. שני המיכלים הללו מאפשרים לך לעקוב אחר החיידקים שבתוכם.
- תרבות היא מונח המשמש לתיאור צמיחתם של אורגניזמים בניסוי.
- מרק הוא מדיום נוזלי בו התרבות צומחת.
שלב 2. השתמשו בצלחת המזיגה או צלחת המריחה
ניתן גם למקם את החיידקים ישירות על המנה לצפייה באמצעות מיקרוסקופ. יוצקים את התרבות על צלוחית ומניחים אותה מתחת למיקרוסקופ. עקוב אחר מספר התאים החיידקיים הקיימים.
שלב 3. ודא שמינון הריכוז נכון
אם יש יותר מדי, החיידקים יערמו זה על זה ואתם עלולים לבצע חישוב לא נכון. לדלל את התרבות על ידי ערבוב עוד מרק. אם יש מעט מדי, תוצאות החישוב לא יהיו מדויקות. מסננים את המרק בעזרת מערכת סינון.
שלב 4. ספירת חיידקים
השלב האחרון הוא לספור את החיידקים אחד אחד. הביטו מבעד לעדשת ההגדלה בחדר הספירה ורשמו את מספר החיידקים שאתם רואים. השווה את התוצאות לתוצאות של בדיקות אחרות.
שיטה 2 מתוך 3: מדידת מסה יבשה ורטובה
שלב 1. ודא שיש ברשותך את הציוד הנכון
שיטה זו משתמשת בציוד יקר והרבה זמן. אם במעבדה שלך אין את הציוד הדרוש לך, מומלץ להשתמש בשיטה אחרת. עם זאת, אם המעבדה שלך מאובזרת מספיק, אנו ממליצים על שיטה זו מכיוון שהיא מספקת תוצאות עקביות יותר. בשיטה זו תזדקק ל:
- תנור הסעה כוח הידראולי
- מיכל שקילה עשוי אלומיניום
- סט צלוחיות (בקבוקי מעבדה)
- מכונה צנטריפוגלית (צנטריפוגה) או מערכת סינון מעבדה
שלב 2. ודא שהתרבות נמצאת בבקבוק
מוסיפים את התרבות לדלעת. בשלב זה התרבות צריכה להיות מרק, אם כי בהמשך היא תופרד שוב.
שלב 3. מייבשים את מיכל השקילה מאלומיניום בתנור המעבדה
במקום זאת, אתה יכול להשתמש בקרום מסנן תאית אצטט בקוטר של 47 מ מ ובגודל נקבוביות של 0.45 מיקרון. בכל מיכל שקילה שאתה משתמש בו, שקול אותו כיוון שיהיה צורך לנכות אותו מאוחר יותר בעת שקילת תאים חיידקיים.
שלב 4. מערבבים את התרבות בבקבוק עד לערבוב אחיד
התא ישקע באופן טבעי בשל כוח הכבידה ויהיה צורך לערבב אותו להתפשט באופן אחיד בבקבוק. כך תוכל לקבל יותר דוגמאות.
שלב 5. השתמש בצנטריפוגה להפריד בין תאי החיידקים למרק
כלי זה מסובב את הבקבוק ומתאזן במהירות כך שהוא מנקז את המרק ומשאיר את התרבות בבקבוק.
שלב 6. גירדו את העיסה על הדלעת והכניסו אותה לכלי שקילה
זרוק את המרק כי אתה כבר לא צריך אותו. עם זאת, אל תיפטר מהדלעת עדיין כי היא עדיין תשמש.
שלב 7. שוטפים את מכונת הצנטריפוגלים ושופכים את מי השטיפה למיכל
זרוק את מי השטיפה בבקבוק על תאי החיידקים כדי להשיג את המשקל הרטוב.
שלב 8. מצא את המשקל היבש
למדידת משקל יבש, הכניסו את הכלי לתנור וייבשו בחום של 100 מעלות צלזיוס במשך 6-24 שעות בהתאם להוראות התנור ו/או מיכל השקילה המשמש. וודא שהטמפרטורה לא גבוהה מדי כדי שהחיידקים לא יישרפו. שקלו את החיידקים בסיום, ואל תשכחו להפחית את התוצאה במשקל מיכל השקילה.
שיטה 3 מתוך 3: מדידת עכירות
שלב 1. הכינו את הציוד הדרוש
תזדקק למקור אור ולספקטרופוטומטר. את שניהם ניתן להשיג בחנויות לציוד מעבדה. לספקטרופוטומטר צריכות להיות הוראות שינחו אותך בשימוש במכשיר בהתאם לדגם שברשותך. המחיר של הספקטרופוטומטר הוא די נוח וקל לשימוש, כך שהוא עשוי להפוך לאחת השיטות הנפוצות ביותר למדידת גדילת החיידקים.
שלב 2. הדליק את המדגם
על פי המונח של ליימן, עכירות היא רמת העכירות של מדגם. עליך לקבל את מספר מדידת העכירות, הנמדד ב- NTU (יחידת עכירות נפאלומטרית). יש לכייל את הכלי הזה לפני שהוא יכול למדוד את המדגם במדויק.
שלב 3. רשום את התוצאות
העכירות מושפעת ממספר החיידקים בדגימה. הספקטרופוטומטר יגיד לך גם את אחוז השידור (%T). נתון זה יגדל אם העכירות תפחת. השווה את התוצאות לתוצאות של בדיקות אחרות למדידת גדילת החיידקים.
אַזהָרָה
- מכיוון שאתה מתמודד עם מושבה חיידקית, נקט באמצעי זהירות על ידי הרכבת ציוד בטיחות כגון משקפי מגן וכפפות. זה גם רעיון טוב ללבוש מסכה, במיוחד אם אינך יודע את סוג החיידקים הנחקרים.
- יש לנקוט באמצעי זהירות לפני הטיפול בכל סוג של חיידקים, אפילו מהסוג הלא מזיק. וודא שכל הפצעים הפתוחים בגופך מכוסים לחלוטין לפני שתתחיל.
