בכימיה, דילול הוא תהליך של הפחתת ריכוז החומר בתמיסה. דילול שרשרת הוא דילול חוזר של פתרון להעלאה מהירה של גורם הדילול. הליך זה מבוצע בדרך כלל בניסויים הדורשים פתרונות מאוד מדוללים עם דיוק גבוה. למשל ניסויים הכוללים עקומות ריכוז בקנה מידה לוגריתמי או ניסויים לקביעת צפיפות החיידקים. דילולים בשרשרת נמצאים בשימוש נרחב בניסויים מדעיים כגון ביוכימיה, מיקרוביולוגיה, פרמקולוגיה ופיזיקה.
שלב
שיטה 1 מתוך 2: ביצוע דילול בסיסי
שלב 1. קבע את פתרון הדילול המתאים
חשוב מאוד לקבוע את הנוזל שישמש לדילול. פתרונות רבים מסיסים במים מזוקקים, אך לא תמיד זה המצב. אם אתם מדללים חיידקים או תאים אחרים, עשו זאת על מדיום תרבות. הנוזל שתבחר ישמש את כל דילולי השרשרת.
אם יש לך ספק לגבי איזה חומר דילול להשתמש, חפש עזרה או חפש באינטרנט. חפש דוגמאות של אחרים שעשו דילולים בשרשרת דומה
שלב 2. הכינו מספר מבחנות המכילות 9 מ"ל של דילואנט
מבחנות משמשות לדילולים ריקים. ראשית, הכנס את הדגימה הבלתי מדוללת לצינור הראשון, ולאחר מכן בצע את הדילולים ברצף לצינורות הבאים.
- סמן את כל הצינורות המשמשים לפני תחילת הדילול, כך שלא תתבלבל ברגע שהניסוי פועל.
- כל צינורית תתמלא ב -10 דילולים, החל מהצינור שהחומר שלו לא מדולל. הדילול בצינור הראשון הוא 1:10, ואחריו 1: 100 בצינור השני, 1: 1000 לשלישית וכן הלאה. קבע את כמות הדילול שיש לבצע מראש, כך שלא תבזבז את תמיסת הדילול.
שלב 3. הכן מבחנה המכילה לפחות 2 מ"ל של תמיסה לא מדוללת
כמות הפתרון המינימלית לדילול הנדרשת לביצוע דילול שרשרת זו היא 1 מ"ל. אם אתה משתמש ב -1 מ"ל בלבד, לא יישאר פתרון ללא דילול. תווית BLM עבור פתרונות לא מדוללים.
מערבבים את הפתרון ביסודיות לפני שמתחילים כל דילול
שלב 4. בצע את הדילול הראשון
קח 1 מ"ל מהפתרון הבלתי מדולל ממבחנה BLM בעזרת פיפטה והכניס אותו למבחנה שכותרתה 1:10 המכילה 9 מ"ל של דילנט, ולאחר מכן מערבב היטב. יש כעת 1 מ"ל של הפתרון הלא מדולל ב- 9 מ"ל של הדילולנט. לפיכך, הפתרון מדולל בגורם דילול של 10.
שלב 5. בצע את הדילול השני
לדילול השני, קח 1 מ"ל מהפתרון מהצינור 1:10, ולאחר מכן הכנס אותו לצינור 1: 100 המכיל גם 9 מ"ל של המדלל. וודא שהפתרון בצינור 1:10 מעורבב לחלוטין לפני הוספתו לצינור הבא. שוב, ודא שהדילול בצינור 1: 100 מעורבב לחלוטין. הפתרון מהצינור 1:10 מדולל פי 10 בצינור 1: 100.
שלב 6. המשך הליך זה לביצוע דילולות שרשרת ארוכות יותר
ניתן לחזור על תהליך זה כמה פעמים שצריך כדי להשיג את ריכוז הפתרון הרצוי. בניסויים באמצעות עקומות ריכוז, ניתן לבצע דילולים בשרשרת כדי לייצר מספר פתרונות בדילולים של 1, 1:10, 1: 100, 1: 1,000.
שיטה 2 מתוך 2: חישוב גורם הדילול והריכוז הסופי
שלב 1. חשב את היחס בין הדילול האחרון בדילול השרשרת
ניתן לקבוע את יחס הדילול הכולל על ידי הכפלת גורם הדילול מכל שלב לשלב הסופי. האיור המתמטי הוא עם הנוסחה Dt = ד1 x ד2 x ד3 x… x D , דt הוא גורם הדילול הכולל ו- D הוא יחס הדילול.
- לדוגמה, נניח שאתה עושה דילול של 1:10 4 פעמים. חבר את גורם הדילול לנוסחה: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10,000
- גורם הדילול בצינור הרביעי בדילול שרשרת זה הוא 1: 10,000. ריכוז החומר לאחר הדילול נמוך פי 10,000 מבעבר לדילול.
שלב 2. קבע את ריכוז הפתרון לאחר דילול
כדי לקבוע את הריכוז הסופי של תמיסה לאחר דילול שרשרת, עליך לדעת את הריכוז הראשוני שלה. הנוסחה היא Cסוֹף = גהתחלה/ד, גסוֹף הוא הריכוז הסופי של הפתרון המדולל, גהתחלה הוא הריכוז הראשוני של הפתרון המקורי, ו- D הוא יחס הדילול שנקבע מראש.
- לדוגמה: אם אתה מתחיל בתמיסת תאים שריכוזו הוא 1,000,000 תאים למ"ל ויחס הדילול הוא 1,000, מהו הריכוז הסופי של הדגימה המדוללת?
-
באמצעות הנוסחה:
- גסוֹף = גהתחלה/ד
- גסוֹף = 1.000.000/1.000
- גסוֹף = 1000 תאים לכל מ"ל.
שלב 3. ודא שכל היחידות זהות
בעת ביצוע חישוב כלשהו, ודא כי היחידות תמיד זהות בסוף החישוב. אם היחידה הראשונית היא תאים לכל מ ל, ודא כי היחידות נשארות זהות בסוף החישוב. אם הריכוז ההתחלתי הוא חלקים למיליון (bpd), הריכוז הסופי חייב להיות גם ביחידות bpj.
